CN115927529A 审中 一种检测变异链球菌生物膜形成量的方法及应用
1.一种检测变异链球菌生物膜形成量的方法,其特征在于,所述检测变异链球菌生物膜形成量的方法包括以下步骤:
第一步,配置琼脂溶液,高压蒸汽灭菌锅中高压下灭菌;液体状态下滴加等量琼脂溶液到孔板;待琼脂凝固,利用镊子将细胞扒片竖直放在孔板中;制作两个各孔均滴加有等量等浓度琼脂溶液的孔板,记为板A,板B;
第二步,取板A,每孔滴加入BHI培养基和变异链球菌菌液,摇床培养;
第三步,利用镊子取出板A各孔的细胞扒片,PBS冲洗,竖直放在板B相应的孔中;板B各孔加入结晶紫溶液进行染色,而后用PBS洗去多余染色剂,接着各孔加入冰醋酸没过细胞扒片,孵育,取出细胞扒片,酶标仪测量OD600nm
2.如权利要求1所述的检测变异链球菌生物膜形成量的方法,其特征在于,所述第一步的孔板为24孔板。
3.如权利要求1所述的检测变异链球菌生物膜形成量的方法,其特征在于,所述第一步的配置1%-3%琼脂溶液,高压蒸汽灭菌锅中121℃高压下灭菌15min。
4.如权利要求1所述的检测变异链球菌生物膜形成量的方法,其特征在于,所述第一步的液体状态下滴加等量琼脂溶液300~500ul/孔到孔板。
5.如权利要求1所述的检测变异链球菌生物膜形成量的方法,其特征在于,所述第一步的待琼脂凝固,利用镊子将直径为14mm的细胞扒片竖直放在24孔板中。
6.如权利要求1所述的检测变异链球菌生物膜形成量的方法,其特征在于,所述第二步取板A,每孔滴加入1000ul BHI培养基和100ul变异链球菌菌液,摇床培养24h。
7.如权利要求6所述的检测变异链球菌生物膜形成量的方法,其特征在于,所述变异链球菌菌液为OD=0.2,1*107/ml。
8.如权利要求1所述的检测变异链球菌生物膜形成量的方法,其特征在于,所述第三步的板B各孔加入1ml 0.1%结晶紫溶液进行染色15min。
9.如权利要求1所述的检测变异链球菌生物膜形成量的方法,其特征在于,所述第三步的各孔加入1ml冰醋酸没过细胞扒片,37℃孵育30min。
10.一种权利要求1~9任意一项所述检测变异链球菌生物膜形成量的方法在细菌性感染口腔疾病监测设备中的应用。
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