KR1020230048439A
审中
抗par-2抗体及其使用方法
权利要求 1
一种与人蛋白酶激活受体2(PAR-2)特异性结合的分离的抗体或其抗原结合片段,其中该抗体或其抗原结合片段是(a)PAR-2激活配体和PAR-2和/或 (b) 通过 PAR-2 激活配体阻断 PAR-2 激活,其中抗体或其抗原结合片段包含人 PAR-2 N 末端的氨基酸。抗体或其不结合59-63的抗原结合片段。
权利要求 2
2. 如权利要求1所述的方法,其中所述抗体或其抗原结合片段具有约0.1nM至约17nM的IC5tl,如通过PAR-2β-抑制蛋白细胞测定所测量的。 50 一种抗体或其抗原结合片段,其中该抗体或其抗原结合片段抑制细胞中可溶性PAR-2激活配体与PAR-2之间的相互作用。
权利要求 3
3. 如权利要求2所述的方法,其中所述抗体或其抗原结合片段为约0.1nM、约0.2nM、约0.3nM、约0.4nM、约0.5nM、约0.6nM、约0.7nM、约0.8nM、约0.9nM。 nM,约1nM,约1.1nM,约1.2nM,约1.3nM,约1.4nM,约1.5nM,约1.6nM,约1.7nM,约1.8nM,约1.9nM,约2nM,2.1nM,约2.2nM,约 2.3nM,约 2.4nM,约 2.5nM,约 2.6nM,约 2.7nM,约 2.8nM,约 2.9nM,约 3nM,3.1nM,约 3.2nM,约 3.3nM,约 3.4nM,约 3.5 nM nM、约 3.6 nM、约 3.7 nM、约 3.8 nM、约 3.9 nM、约 4 nM、4.1 nM、约 4.2 nM、约 4.3 nM、约 4.4 nM、约 4.5 nM、约 4.6 nM、约 4.7 nM,约4.8nM,约4.9nM,约5nM,约5.1nM,约5.2nM,约5.3nM,约5.4nM,约5.5nM,约5.6nM,约5.7nM,约5.8nM,约5.9nM,约 6 nM、6.1 nM、约 6.2 nM、约 6.3 nM、约 6.4 nM、约 6.5 nM、约 6.6 nM、约 6.7 nM、约 6.8 nM、约 6.9 nM、约 7 nM、约 7.1 nM、约 7.2 nM , 约 7.3 nM, 约 7.4 nM, 约 7.5 nM, 约 7.6 nM, 约 7.7 nM, 约 7.8 nM, 约 7.9 nM, 约 8 nM, 约 8.1 nM, 约 8.2 nM, 约 8.3 nM, 约 8.4 nM, 约8.5 nM,约 8.6 nM,约 8.7 nM,约 8.8 nM,约 8.9 nM,约 9 nM,约 9.1 nM,约 9.2 nM,约 9.3 nM,约 9.4 nM,约 9.5 nM,约 9.6 nM,约 9.7 nM ,约9.8nM,约9.9nM,约10nM,约10.1nM,约10.2nM,约10.3nM,约10.4nM,约10.5nM,约10.6nM,约10.7nM,约10.8nM,约10.9nM,约11 nM,约 11.1 nM,约 IC 为 11.2 nM,约 11.3 nM,约 11.4 nM,约 11.5 nM,约 11.6 nM,约 11.7 nM,约 11.8 nM 或约 11.9 nM 50 其中抗体或其抗原结合片段抑制可溶性PAR-2激活配体和PAR-2之间的相互作用。
权利要求4
4.如权利要求1至3中任一项所述的方法,其中所述抗体或其抗原结合片段具有约6nM至约11nM的IC5tl,如通过PAR-2钙通量细胞测定所测量的。 50 一种抗体或其抗原结合片段,其中该抗体或其抗原结合片段将PAR-2活化配体诱导和胰蛋白酶诱导的细胞内钙流抑制到一定范围。
权利要求5
5.根据权利要求4所述的方法,其中所述抗体或其抗原结合片段为约6nM、6.1nM、约6.2nM、约6.3nM、约6.4nM、约6.5nM、约6.6nM、约6.7nM、约6.8 nM,约 6.9 nM,约 7 nM,7.1 nM,约 7.2 nM,约 7.3 nM,约 7.4 nM,约 7.5 nM,约 7.6 nM,约 7.7 nM,约 7.8 nM,约 7.9 nM,约 8 nM, 8.1 nM,约 8.2 nM,约 8.3 nM,约 8.4 nM,约 8.5 nM,约 8.6 nM,约 8.7 nM,约 8.8 nM,约 8.9 nM,约 9 nM,9.1 nM,约 9.2 nM,约 9.3 nM,约 9.4 nM,约 9.5 nM,约 9.6 nM,约 9.7 nM,约 9.8 nM,约 9.9 nM,约 10 nM,约 10.1 nM,约 10.2 nM,约 10.3 nM,约 10.4 nM,约 10.5 nM,约 10.6 nM,约 10.7 nM,IC50 约 10.8 nM 或约 10.9 nM 50 一种抗体或其抗原结合片段,其中该抗体或其抗原结合片段将PAR-2活化配体诱导和胰蛋白酶诱导的钙流抑制到一定范围。
权利要求 6
6.根据权利要求4或5所述的抗体或其抗原结合片段,其中所述细胞是人肺成纤维细胞或上皮细胞。
权利要求 7
7. 根据权利要求1至6中任一项所述的方法,其中所述抗体或其抗原结合片段减少至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%与相同同种型的对照抗体相比,它抑制 PAR-2 激活配体诱导的平滑肌细胞收缩至少 95% 或至少 98%。
权利要求8
8.根据权利要求7所述的抗体或其抗原结合片段,其中所述肌细胞是支气管平滑肌细胞。
权利要求 9
9. 根据权利要求1至8中任一项所述的方法,其中所述抗体或其抗原结合片段减少至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%与相同同种型的对照抗体相比,其抑制食蟹猴肺中性粒细胞增多的诱导至少 95% 或至少 98%。
权利要求 10
10.根据权利要求9所述的抗体或其抗原结合片段,其中所述肺中性粒细胞增多是屋尘螨诱导的肺中性粒细胞增多。
权利要求 11
特异性结合人 PAR-2,每个 SEQ ID NO: 1 (GFSLX 1 X 2 永兴 3 X 4 X 5 ), 2 (VIWGNX 6 NX 7 YYX 8 ), 3 (WX 9 GX 10 康得新 11 PFDY), 4 (X 12 ASQNX 13 YK-X 14 LD), 5 (X 15 X 16 X 17 X 18 X 19 X 20 T) 和 6 (X 21 青海兴 22 X 23 分离的抗体或其抗原结合片段包含GWT的重链可变区(VH)互补决定区(CDR)1、VH CDR2、VH CDR3和轻链可变区(VL)CDR1、CDR2和CDR3序列),其中: X 1 = 天冬酰胺 (N) 或丝氨酸 (S),X 2 = 丝氨酸 (S) 或酪氨酸 (Y),X 3 = 甘氨酸 (G) 或丙氨酸 (A),X 4 = 缬氨酸 (V)、甘氨酸 (G) 或异亮氨酸 (I)、X 5 = 异亮氨酸 (I) 或丝氨酸 (S),X 6 = 甘氨酸 (G) 或谷氨酰胺 (Q),X 7 = 苏氨酸 (T) 或缬氨酸 (V),X 8 = 天冬酰胺 (N)、丙氨酸 (A)、甘氨酸 (G) 或酪氨酸 (Y)、X 9 = 精氨酸 (R) 或赖氨酸 (K),X 10 = 酪氨酸 (Y)、色氨酸 (W) 或苯丙氨酸 (F)、X 11 = 酪氨酸 (Y) 或组氨酸 (H),X 12 = 赖氨酸 (K) 或精氨酸 (R), X 13 = 异亮氨酸 (I) 或缬氨酸 (V),X 14 = 酪氨酸 (Y)、色氨酸 (W) 或苯丙氨酸 (F)、X 15 = 天冬酰胺 (N) 或天冬氨酸 (D),X 16 = 苏氨酸 (T) 或丙氨酸 (A),X 17 = 天冬酰胺 (N)、丝氨酸 (S) 或酪氨酸 (Y)、X 18 = 丝氨酸 (S)、苏氨酸 (T) 或天冬酰胺 (N)、X 19 = 亮氨酸 (L) 或精氨酸 (R),X 20 = 组氨酸 (H) 或丙氨酸 (A),X 21 = 亮氨酸 (L) 或谷氨酰胺 (Q),X 22 = 天冬酰胺 (N)、甘氨酸 (G) 或组氨酸 (H),以及 X 23 =丝氨酸(S)或组氨酸(H)抗体或其抗原结合片段。
权利要求 12
12.根据权利要求11所述的抗体或其抗原结合片段,其包含分别为SEQ ID NO:10、11、12、16、17和18的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3和VL CDR1、CDR2和CDR3序列。
权利要求 13
13. 如权利要求1至12中任一项所述的抗体或其抗原结合片段,其中所述抗体或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO: 20或21和SEQ ID NO: 23的氨基酸序列的VH , 24, 25, 26 或 27 包含 VL 的抗体或其抗原结合片段包含氨基酸序列。
权利要求 14
14. 根据权利要求1至13中任一项所述的抗体或其抗原结合片段,其中所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区,所述轻链可变区包含以下氨基酸序列: )分别为 SEQ ID NO:20 和 23;(b)分别为 SEQ ID NO:21 和 24;(c)分别为 SEQ ID NO:21 和 25;(d)分别为 SEQ ID NO:21 和 26; 或(e)分别为SEQ ID NO:21和27。
权利要求 15
特异性结合人PAR-2的分离的抗体或其抗原结合片段,其中抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区,其中重链可变区具有SEQ ID NO:包含20或21的氨基酸序列的抗体或其抗原结合片段。
权利要求 16
特异性结合人PAR-2的分离的抗体或其抗原结合片段,其中抗体包含重链可变区和轻链可变区,其中轻链可变区包含SEQ ID NO:23、24、25;包含26或27的氨基酸序列的抗体或其抗原结合片段。
权利要求 17
17. 权利要求 1-16 中任一项的方法,其中所述抗体或其抗原结合片段是约 4 X 10 -10 M 至约 1 X 10 -9 M与人PAR-2的结合亲和力 (K D ) 具有抗体或其抗原结合片段。
权利要求 18
18.根据权利要求1至17中任一项所述的抗体或其抗原结合片段,其中所述抗体或其抗原结合片段结合食蟹猴PAR-2。
权利要求 19
19. 如权利要求18所述的方法,其中所述抗体或其抗原结合片段是约4 X 10 -9 M 至约 5 X 10 -9 M与食蟹猴PAR-2的结合亲和力 (K D ) 具有抗体或其抗原结合片段。
权利要求 20
20.根据权利要求1至19中任一项所述的抗体或其抗原结合片段,其中所述抗体或其抗原结合片段特异性结合人和大鼠PAR-2。
权利要求 21
21.根据权利要求1至20中任一项所述的抗体或其抗原结合片段,其中所述抗体或其抗原结合片段包含重链恒定区和轻链恒定区。
权利要求 22
22.根据权利要求21所述的方法,其中所述重链恒定区是人IgG 1 , 免疫球蛋白 2 , 免疫球蛋白 3 和IgG 4 是选自同种型的同种型的抗体或其抗原结合片段。
权利要求 23
23.根据权利要求21或22所述的方法,其中所述重链恒定区是人IgG 4 是重链恒定区的抗体或其抗原结合片段。
权利要求 24
23.根据权利要求21或22所述的人IgG,其中所述重链恒定区具有一个或多个氨基酸取代。 4 是重链恒定区的抗体或其抗原结合片段。
权利要求 25
25. 权利要求24的人IgG 4 抗体或其抗原结合片段,其中重链恒定区具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸取代。
权利要求 26
22.根据权利要求21所述的抗体或其抗原结合片段,其中所述轻链恒定区是人IgGκ轻链恒定区。
权利要求 27
27. 如权利要求1-23和26中任一项所述的方法,其中所述抗体或抗原结合片段包含重链恒定区和轻链恒定区,其中所述重链恒定区是人IgG 4 重链恒定区,其中轻链恒定区为人IgGκ轻链恒定区。
权利要求 28
27. 如权利要求1-22、24或26中任一项所述的方法,其中所述抗体或抗原结合片段包含重链恒定区和轻链恒定区,其中所述重链恒定区经历一个或多个氨基酸替换. 人 IgG 与 4 重链恒定区,其中轻链恒定区为人IgGκ轻链恒定区。
权利要求 29
29. 权利要求24或28的人IgG 4 抗体或其抗原结合片段,其中重链恒定区包含S228P取代(通过EU编号)。
权利要求 30
29. 权利要求24或28的人IgG 4 抗体或其抗原结合片段,其中重链恒定区包含末端赖氨酸缺失(K447Δ)(通过EU编号)。
权利要求 31
31.根据权利要求1至30中任一项所述的抗体或其抗原结合片段,其中所述抗体或其抗原结合片段是嵌合抗体、人源化抗体或其抗原结合片段。
权利要求 32
32.根据权利要求1至31中任一项所述的抗体或其抗原结合片段,其中所述抗体或其抗原结合片段适合施用于人类受试者。
权利要求 33
33.根据权利要求1至32中任一项所述的抗体或其抗原结合片段,其为全长抗体。
权利要求 34
33.根据权利要求1至32中任一项的抗体或其抗原结合片段,其是抗原结合片段。
权利要求 35
35.根据权利要求34所述的方法,其中所述抗原结合片段是Fab、Fab'、F(ab') 2 , 单链 Fv (scFv), 二硫键连接的 Fv, IgNar, intrabody, IgGΔCH2, minibody, F(ab') 3 , tetrabody, triabody, diabody, 单域抗体, DVD-Ig, Fcab, mAb 2 , (单链抗体) 2 或 scFv-Fc 的抗原结合片段。
权利要求 36
34.如权利要求33所述的抗体或其抗原结合片段,其包含经改造以降低效应子功能的Fc结构域。
权利要求 37
37.如权利要求1-36中任一项所述的抗体或其抗原结合片段,还包含可检测标记。
权利要求 38
38.分离的多核苷酸,其包含编码权利要求1-37中任一项的抗体或其抗原结合片段的重链或重链可变区的核酸分子。
权利要求 39
39.根据权利要求38所述的分离的多核苷酸,其中所述核酸分子编码SEQ ID NO:20或21的VH。
权利要求 40
38.分离的多核苷酸,其包含编码权利要求1-37中任一项的抗体或其抗原结合片段的轻链或轻链可变区的核酸分子。
权利要求 41
41.根据权利要求40所述的分离的多核苷酸,其中所述核酸分子编码SEQ ID NO:23、24、25、26或27的VL。
权利要求 42
分离的多聚体,其包含编码SEQ ID NO:23、24、25、26或27的轻链可变区的第一核酸分子和编码SEQ ID NO:21或21的重链可变区的第二核酸分子核苷酸。
权利要求 43
包含编码 SEQ ID NO: 23、24、25、26 或 27 的轻链可变区的核酸分子和编码 SEQ ID NO: 20 或 21 的重链可变区的核酸分子的第一多核苷酸的混合物包含第二个多核苷酸的分离的多核苷酸的集合。
权利要求 44
权利要求1至36任一项的抗体或其抗原结合片段的重链可变区或重链和权利要求1至36任一项的抗体或其抗原结合片段的轻链可变区或轻链36 一种分离的多核苷酸,包含编码的核酸分子。
权利要求 45
45.分离的载体,其包含权利要求38-44中任一项的多核苷酸。
权利要求 46
(a) 权利要求 38 至 44 中任一项的多核苷酸, (b) 权利要求 45 的载体,或 (c) 包含权利要求38或权利要求39的多核苷酸的第一载体和包含第二载体的宿主细胞,所述第二载体包含所述多核苷酸权利要求 41。
权利要求 47
47. 如权利要求46所述的方法,其中在组织培养物中E。 大肠杆菌( 大肠杆菌 ), 假单胞菌 ( 假单胞菌属 ), 芽孢杆菌 ( 杆菌属 ), 链霉菌 ( 链霉菌属 )、酵母、Expi293F 人细胞、C6(大鼠胶质瘤细胞系)、U2OS、Chem-1、CHO、YB/20、NS0、PER-C6、HEK-293T、NIH-3T3、HeLa、BHK、Hep G2、SP2 /0、R1.1、B-W、L-M、COS 1、COS 7、BSC1、BSC40、BMT10细胞、植物细胞、昆虫细胞和人类细胞。
权利要求 48
48.根据权利要求47所述的宿主细胞,其中所述宿主细胞是CHO-K1SV细胞。
权利要求 49
一种产生结合人 PAR-2 的抗体或其抗原结合片段的方法,包括培养权利要求 46 至 48 中任一项的宿主细胞,使得表达核酸分子并且抗体或其抗原结合片段是产生并且任选地,其中该方法还包括从培养物中分离抗体或其抗原结合片段。
权利要求 50
一种分离的抗体或其抗原结合片段,其特异性结合人PAR-2并且由权利要求38-44中任一项的多核苷酸编码或通过权利要求49的方法产生。
权利要求 51
一种药物组合物,其包含权利要求1至36和50中任一项的抗体或其抗原结合片段以及药学上可接受的赋形剂。
权利要求 52
通过 PAR-2 激活配体,包括用权利要求 1 至 36 和 50 中任一项的抗体或其抗原结合片段或权利要求 51 的药物组合物阻断配体与 PAR-2 的结合。在体外或体内抑制 PAR-2 的激活。
权利要求 53
53.如权利要求52所述的方法,其中所述PAR-2激活配体是可溶性PAR-2激活配体、PAR-2束缚配体或PAR-1束缚配体。
权利要求 54
一种治疗患者气道疾病的方法,包括向患者施用治疗有效量的权利要求1-36和50中任一项的抗体或其抗原结合片段或权利要求51的药物组合物。
权利要求 55
55.权利要求54的方法,其中气道疾病选自哮喘、慢性阻塞性肺病、特发性肺纤维化和肺动脉高压。
权利要求 56
52.一种减轻患者疼痛的方法,包括向患者施用治疗有效量的权利要求1-36和50中任一项的抗体或其抗原结合片段或权利要求51的药物组合物。
权利要求 57
57.根据权利要求56所述的方法,其中所述疼痛是癌痛、关节痛、化疗引起的周围神经病变疼痛、牙痛、膀胱痛、胰腺炎疼痛、肠易激综合征相关疼痛、内脏痛、骨关节炎相关疼痛、类风湿性关节炎相关疼痛疼痛,一种选自脊髓损伤疼痛和偏头痛的方法。
权利要求 58
一种治疗患者癌症的方法,包括向患者施用治疗有效量的权利要求1-36和50中任一项的抗体或其抗原结合片段或权利要求51的药物组合物。
权利要求 59
59.根据权利要求57或58所述的方法,其中所述癌症选自骨癌、胰腺癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、成胶质细胞瘤、黑色素瘤、前列腺癌、乳腺癌、结肠癌或其任何组合。
权利要求 60
一种治疗患者皮肤病的方法,包括向患者施用治疗有效量的权利要求1-36和50中任一项的抗体或其抗原结合片段或权利要求51的药物组合物。
权利要求 61
64.根据权利要求63所述的方法,其中所述皮肤病症的特征在于特应性皮炎、过敏性接触性皮炎、Netherton综合征、鱼鳞病、损伤后皮肤屏障/渗透性的恢复、瘙痒症、皮肤癌、皮肤瘙痒症、与黄褐斑相关的色素沉着,和白癜风并且选自由相关色素沉着组成的组。
权利要求 62
一种治疗患者口面部肉芽肿病的方法,包括向患者施用治疗有效量的权利要求1-36和50中任一项的抗体或其抗原结合片段或权利要求51的药物组合物。
权利要求 63
一种治疗患者炎症的方法,包括向患者施用治疗有效量的权利要求1-36和50中任一项的抗体或其抗原结合片段或权利要求51的药物组合物。
权利要求 64
64.根据权利要求63所述的方法,其中所述炎性病症是类风湿性关节炎、骨关节炎、炎症诱导的内脏超敏反应、牙周病或与急性冠状病毒感染相关的病理。
权利要求 65
一种检测样品中PAR-2的方法,包括使样品与权利要求1-36和50中任一项的抗体或其抗原结合片段或权利要求51的药物组合物接触。
权利要求 66
66.根据权利要求65所述的方法,其中所述样品获自人类受试者,任选地其中所述样品是癌症样品。
权利要求 67
66.如权利要求65所述的方法,其中所述样品是体外样品。
权利要求 68
51.如权利要求1-36和50中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段,其中该抗体或其抗原结合片段不结合人PAR-2的N-末端。
