CN112410401B 有效 一种获得片段化DNA单链池的方法及其应用
1.一种获得片段化DNA单链池的方法,其特征在于,包括:
步骤1、将片段化DNA进行5’磷酸化;针对靶基因待测位点设计单条互补引物,所述单条互补引物5’端与靶基因结合位点位于所述待测位点的3’端一侧10-30bp;所述单条互补引物与靶基因结合区域不包含所述待测位点;
步骤2、以步骤1的5’磷酸化的片段化DNA为模板,利用所述单条互补引物进行PCR扩增;其中,PCR扩增体系中需加入ddNTPs和dNTPs;
步骤3、PCR扩增结束后加入lambda核酸外切酶降解掉模板,获得片段化DNA单链池。
2.根据权利要求1所述方法,其特征在于,所述单条互补引物在PCR扩增体系中的浓度至少为0.2μM。
3.根据权利要求1所述方法,其特征在于,所述PCR扩增体系中ddNTPs与dNTPs的比例为(0.02-50):1。
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