本发明公开了一种高灵敏非洲猪瘟病毒核酸检测方法的建立，属于核酸检测技术领域，一种高灵敏非洲猪瘟病毒核酸检测方法的建立，可以实现通过巢式荧光定量PCR技术，准确诊断、早期筛查和高效检测出非洲猪瘟病毒，根据非洲猪瘟病毒vp72基因设计的引物和探针、建立荧光定量探针法PCR反应体系、将配制好的反应体系放入荧光定量PCR扩增仪中进行荧光定量PCR扩增，设计探针和内外2对引物，经过一次PCR扩增，利用外引物、外引物、内引物和内引物得到四种导向的qPCR扩增产物,从而使巢式PCR内外部引物和特异性探针的设计能够提高检测结果的准确性和特异性，又因其扩增效率显著提高增加了检测的灵敏性，从而有效的减少了检测的时间，提高了检测效率。