IN202327005507A
审中
基因工程活细菌及其构建方法
理赔
[权利要求1]
基因工程活细菌 包括 至少一种编码至少一种医学效应子的效应子基因; 以及至少一种缩短细菌寿命的基因修饰,使得活细菌在被施用于受试者后,在足够长的时间内存活以允许医疗效应器发挥至少一种医疗作用,并在时间过后死亡 尽量减少受试者的发病机制; 其中细菌来源于强毒株。
[权利要求2]
权利要求1的细菌, 其中 医学效应物是一种抗原,它可以在受试者中引起至少一种足以治疗目标疾病或病症的免疫反应。
[权利要求3]
权利要求1的细菌, 其中 医学效应物是一种治疗因子,它可以在受试者中引起至少一种免疫反应和/或减小足以治疗目标疾病或病症的目标损伤的大小。
[权利要求4]
权利要求2或3的细菌, 其中 免疫反应是由 CD4+ 和/或 CD8+ T 细胞引起的。
[权利要求5]
权利要求1的细菌, 其中 所述医学效应物是由所述细菌的同源基因表达的抗原或治疗因子。
[权利要求6]
权利要求1的细菌, 其中 所述医学效应物是从异源基因表达的抗原或治疗因子。
[权利要求7]
权利要求6的细菌, 其中 异源基因进一步包括提高细菌中异源表达的前导序列和/或终止区。
[权利要求8]
权利要求3或6的细菌, 其中 治疗因子是一种细胞毒素,它会导致目标病变中的细胞溶解。
[权利要求9]
权利要求2或权利要求3的细菌, 其中 目标疾病或病症是癌症或肿瘤,并且其中医学效应物在受试者中引起肿瘤抑制。
[权利要求10]
权利要求1的细菌, 其中 该细菌不能在受试者体内复制或定殖。
[权利要求11]
权利要求1的细菌, 其中 基因修饰是细菌染色体中至少一个必需基因或营养缺陷型基因的缺失或突变。
[权利要求12]
前述权利要求中任一项的细菌, 其中 该细菌是二氨基庚二酸的营养缺陷型。
[权利要求13]
前述权利要求中任一项的细菌, 其中 基因修饰是从细菌染色体中删除天冬氨酸半醛脱氢酶 (asd)。
[权利要求14]
前述权利要求中任一项的细菌, 其中 细菌具有可通过将细菌暴露于一种或多种调节效应物来控制的存活时间,所述调节效应物在体内施用时调节细菌的存活时间。
[权利要求15]
权利要求14的细菌, 其中 调节效应物是二氨基庚二酸。
[权利要求16]
前述权利要求中任一项的细菌, 其中 医学效应子是由选自下组的基因表达的同源肽:chuA、yjaA、tspE4C2、sat、sfa、papG、fyuA、iutA、hlyACBD、yfcV和pks island。
[权利要求17]
前述权利要求中任一项的细菌, 其中 医学效应物是选自铜绿假单胞菌外溶素A(ExlA)、蜡样芽孢杆菌非溶血性肠毒素(Nhe)、溶血素和幽门螺杆菌空泡毒素及其组合的细胞毒素。
[权利要求18]
前述权利要求中任一项的细菌, 其中 医学效应物是选自由CpG、环状二核苷酸和肿瘤抗原组成的组的抗癌因子。
[权利要求19]
前述权利要求中任一项的细菌, 其中 该细菌来源于埃希氏菌属、沙门氏菌属、志贺氏菌属、李斯特菌属、类杆菌属、双歧杆菌属、梭菌属、乳杆菌属或乳球菌属。
[权利要求20]
前述权利要求中任一项的细菌, 其中 该细菌来自大肠杆菌。
[权利要求21]
前述权利要求中任一项的细菌, 其中 该细菌来源于保藏于中国普通微生物菌种保藏中心(CGMCC)的SH3菌株,保藏号为: 19836.
[权利要求22]
前述权利要求中任一项的细菌, 其中 该细菌表达与SEQ ID No: 35的全部或片段具有至少约80%、85%、90%、95%或100%序列同一性的序列。
[权利要求23]
前述权利要求中任一项的细菌, 其中 该细菌来源于保藏于中国普通微生物菌种保藏中心(CGMCC)的 mp107 菌株,保藏号为 19835.
[权利要求24]
前述权利要求中任一项的细菌, 其中 该细菌被配制成静脉内给药。
[权利要求25]
前述权利要求中任一项的细菌, 其中 , 当静脉内给药时,足以使发病机制最小化的时间少于 2 天、5 天或 11 天。
[权利要求26]
前述权利要求中任一项的细菌, 其中 该细菌被配制为局部给药。
[权利要求27]
前述权利要求中任一项的细菌, 其中 当在注射部位局部给药时,该细菌可在注射部位存活长达 5 天,但在注射部位外 48 小时内死亡。
[权利要求28]
权利要求24的细菌, 其中 该细菌以 7.5 × 10 9 cfu/kg 小鼠的等效剂量给药。
[权利要求29]
前述权利要求中任一项的细菌, 其中 该疾病是癌症或肿瘤,并且该细菌是肿瘤内给药的。
[权利要求30]
权利要求29的细菌, 其中 以每克约 100-200 mm 3 的肿瘤至少 5 x 10 8 cfu 的等效剂量施用细菌。
[权利要求31]
权利要求1-20任一项的细菌, 其中 至少一种效应基因包含细胞毒素基因和溶血素III编码基因的部分DNA片段。
[权利要求32]
权利要求31的细菌, 其中 细胞毒素是铜绿假单胞菌胞外溶素A(ExlA)。
[权利要求33]
权利要求31或32中任一项的细菌, 其中 该细菌来源于保藏于中国普通微生物菌种保藏中心(CGMCC)的 mp106 菌株,保藏号为 22556。
[权利要求34]
前述权利要求中任一项的细菌, 还包括 至少一种减弱细菌毒力的毒力基因修饰。
[权利要求35]
权利要求34的细菌, 其中 至少一种毒力基因修饰是细菌染色体上至少一种毒力基因的缺失或突变。
[权利要求36]
权利要求34或35中任一项的细菌, 其中 毒力基因修饰是从细菌染色体上删除 hlyCABD 操纵子。
[权利要求37]
权利要求36中任一项的细菌, 其中 该细菌来源于保藏于中国普通微生物菌种保藏中心(CGMCC)的SH4菌株,保藏号为: 22557。
[权利要求38]
权利要求34-37中任一项的细菌, 其中 该细菌表达与SEQ ID No: 40的全部或片段具有至少约80%、85%、90%、95%或100%序列同一性的序列。
[权利要求39]
权利要求34-37中任一项的细菌, 其中 该细菌表达与SEQ ID No:41的全部或片段具有至少约80、85、90、95或100%序列同一性的第一序列和/或具有至少约80、85、90、95的第二序列 或与 SEQ ID No: 42 的全部或片段具有 100% 的序列同一性。
[权利要求40]
权利要求38或39中任一项的细菌, 其中 该细菌来源于保藏于中国普通微生物菌种保藏中心(CGMCC)的 mp105 菌株,保藏号为 22555。
[权利要求41]
权利要求31-40中任一项的细菌, 其中 该细菌以 2 x 10 8 cfu/小鼠的等效剂量给药。
[权利要求42]
权利要求34-40中任一项的细菌, 其中 该细菌配制成静脉内注射和瘤内注射联合给药。
[权利要求43]
权利要求42的细菌, 其中 瘤内注射的等效剂量为7.5×10 7 cfu/小鼠,静脉注射的等效剂量为3×10 7 cfu/小鼠。
[权利要求44]
大肠杆菌的活细菌, 包括 细菌染色体天冬氨酸半醛脱氢酶 (asd) 的基因缺失; 其中细菌来源于强毒株。
[权利要求45]
权利要求44的细菌, 其中 该细菌表达至少一种编码医学效应子的效应子基因。
[权利要求46]
权利要求44的细菌, 其中 该细菌来源于保藏于中国普通微生物菌种保藏中心(CGMCC)的SH3菌株,保藏号为: 19836.
[权利要求47]
权利要求44的细菌, 其中 该细菌还包含编码铜绿假单胞菌胞外溶素A (ExlA)的基因。
[权利要求48]
权利要求47的细菌, 其中 该基因与 SEQ ID NO: 35 的全部或片段具有至少约 80%、85%、90%、95% 或 100% 的序列同一性。
[权利要求49]
权利要求44的细菌, 其中 该细菌来源于保藏于中国普通微生物菌种保藏中心(CGMCC)的 mp107 菌株,保藏号为 19835.
[权利要求 50]
权利要求44的细菌, 其中 至少一种效应基因包含细胞毒素基因和溶血素III编码基因的部分DNA片段。
[权利要求51]
权利要求50的细菌, 其中 细胞毒素是铜绿假单胞菌胞外溶素A(ExlA)。
[权利要求52]
权利要求 50 或 51 中任一项的细菌, 其中 该细菌来源于保藏于中国普通微生物菌种保藏中心(CGMCC)的 mp106 菌株,保藏号为 22556。
[权利要求53]
权利要求44-52中任一项的细菌, 还包括 至少一种减弱细菌毒力的毒力基因修饰。
[权利要求54]
权利要求53的细菌, 其中 至少一种毒力基因修饰是细菌染色体上至少一种毒力基因的缺失或突变。
[权利要求55]
权利要求 53 或 54 中任一项的细菌, 其中 毒力基因修饰是从细菌染色体上删除 hlyCABD 操纵子。
[权利要求56]
权利要求55的细菌, 其中 该细菌来源于保藏于中国普通微生物菌种保藏中心(CGMCC)的SH4菌株,保藏号为: 22557。
[权利要求57]
权利要求53-56中任一项的细菌, 其中 该细菌表达与SEQ ID No: 40的全部或片段具有至少约80%、85%、90%、95%或100%序列同一性的序列。
[权利要求58]
权利要求53-56中任一项的细菌, 其中 该细菌表达与SEQ ID No:41的全部或片段具有至少约80、85、90、95或100%序列同一性的第一序列和/或具有至少约80、85、90、95的第二序列 或与 SEQ ID No: 42 的全部或片段具有 100% 的序列同一性。
[权利要求59]
权利要求 57 或 58 中任一项的细菌, 其中 该细菌来源于保藏于中国普通微生物菌种保藏中心(CGMCC)的 mp105 菌株,保藏号为 22555。
[权利要求60]
权利要求50-59中任一项的细菌, 其中 该细菌以 2 x 10 8 cfu/小鼠的等效剂量给药。
[权利要求61]
权利要求53-59中任一项的细菌, 其中 该细菌配制成静脉内注射和瘤内注射联合给药。
[权利要求62]
权利要求61的细菌, 其中 瘤内注射的等效剂量为7.5×10 7 cfu/小鼠,静脉注射的等效剂量为3×10 7 cfu/小鼠。
[权利要求63]
免疫原性组合物, 包括 前述权利要求中任一项的细菌。
[权利要求64]
一种活菌疫苗, 包括 前述权利要求中任一项的细菌和任选的佐剂。
[权利要求65]
一种治疗疾病或病症的方法, 包括 向受试者施用包含有效量的前述权利要求中任一项的细菌的组合物。
[权利要求66]
权利要求65的方法, 其中 该疾病是肿瘤或癌症。
[权利要求67]
一种构建基因工程活细菌的方法, 包括 以下步骤:对细菌进行基因工程改造,使该细菌的寿命较短,从而使该细菌在施用于受试者后,在足以让医疗效应器发挥至少一种医疗作用的时间内存活,并在一段时间内死亡 足以使对受试者的发病机理最小化,其中细菌来源于强毒株。
[权利要求68]
权利要求67的方法, 还包括 步骤:对细菌进行基因工程以表达至少一种医学效应子。
