技术领域 [0001]本发明涉及微生物发酵领域，具体涉及一种酿酒酵母及其应用。 背景技术 [0002]锌和硒是人和动物体生命活动必须的微量元素，具有促进生长发育、提高繁殖能力和调节免疫功能等重要作用。传统的补硒剂和补锌剂是以无机盐的形式存在，这种形式在应用中出现了很多弊病，如不利于吸收利用、和其它添加剂协同配伍性差等。近年来不同来源的有机态硒和锌因其稳定性及在营养上应用的有效性而被采用，但就目前来看，由于成本较高，制造工艺还不够完善，工业生产微生物富集金属元素并且广泛使用还有一定困难。近十几年来，用微生物作为载体富集人及动物必需的微量元素以获得有机态、成本低廉的微量元素添加剂日益引起了各国的关注。 [0003]富硒酵母和富锌酵母是在培养酵母的过程中分别加入了硒元素和锌元素，酵母生长时吸收利用了硒和锌，使硒和锌与酵母体内的氨基酸和多糖有机结合转化为有机硒锌，从而消除了无机硒(如亚硒酸钠)和无机锌对人体的毒副反应和肠胃刺激，使硒锌能够高效、安全地被人体吸收利用。目前科研人员已分离培养了多种富集微量元素的酿酒酵母，其中以富硒酿酒酵母居多，同时富集硒锌两种元素人体必需微量元素的酿酒酵母鲜有报道，并且现有酿酒酵母同时富集硒锌的能力仍有待提升。 [0004]明胶软糖是指以食用明胶作为凝胶剂，通过加入白砂糖或淀粉糖等辅料所制成的一种软糖，深受青少年的喜爱，因此可以通过增加软糖中的硒锌含量来实现补硒补锌目的，以促进青少年的生长发育。明胶软糖的制备步骤包括溶胶、熬糖、冷却、调味和浇模等，为了赋予明胶软糖酸甜的口感，软糖在调味时往往会加入柠檬酸等酸味剂，使得在浇模前的环境为酸性，并且由于明胶软糖冷却后容易形成凝胶，软糖在浇模前的温度要保持在50～60℃，这种酸性和高温会使得大多数微生物死亡，不利于富硒锌的微生物营养强化剂的在软糖中应用。 [0005]因此，提供一种能够同时高效富集硒锌且耐高温性和耐酸性强的酿酒酵母，将其富集硒锌后作为营养强化剂加入到软糖中，对于以青少年爱吃的食品形式进行补硒补锌来促进其生长发育具有重要的应用价值和现实意义。 发明内容 [0006]因此，本发明要解决的技术问题在于提供一种能够同时高效富集硒锌且耐高温性和耐酸性强的酿酒酵母，富集硒锌后作为营养强化剂加入到软糖中，从而达到以一种青少年爱吃的食品形式进行补硒补锌，促进他们的生长发育的目的。 [0007]为实现上述目的，本发明提供如下技术方案： [0008]第一方面，本发明提供一种酿酒酵母，具体为酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)mei2101.1，于2022年10月17日，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCCNo.25928。 [0009]第二方面，本发明提供含有所述的酿酒酵母的菌剂。 [0010]第三方面，本发明提供所述的酿酒酵母在制备富硒锌酵母中的应用。 [0011]第四方面，本发明提供一种软糖，包括富硒锌酵母，所述富硒锌酵母由所述的酿酒酵母在富硒锌培养基中培养得到。 [0012]进一步地，所述富硒锌培养基为含有30～120mg/L Se⁴⁺和100～500mg/LZn²⁺的酵母浸出粉胨葡萄糖培养基。 [0013]进一步地，所述富硒锌培养基为含有60mg/L Se⁴⁺和300mg/L Zn²⁺的酵母浸出粉胨葡萄糖培养基。 [0014]进一步地，所述富硒锌酵母的制备方法包括以下步骤：在无菌条件下，将所述酿酒酵母接入所述富硒锌培养基中，在28～37℃下培养16～24h，经过富集培养的菌体在8000～10000rpm离心10～15min后收集得到。 [0015]进一步地，所述的软糖包括如下重量份数的原料组分：水25～30份、麦芽糖醇25～30份、麦芽糖浆25～30份、浓缩果汁8～12份、明胶6～8份、柠檬酸0.3～0.5份、柠檬酸钠0.1～0.2份，其中，以水、麦芽糖醇、麦芽糖浆和浓缩果汁的重量之和计，每克添加1×10⁸～5×10⁸CFU活菌数的富硒锌酵母。 [0016]进一步地，所述的软糖包括如下重量份数的原料组分：水30份、麦芽糖醇30份、麦芽糖浆30份、浓缩果汁10份、明胶7.5份、柠檬酸0.4份、柠檬酸钠0.1份，其中，以水、麦芽糖醇、麦芽糖浆和浓缩果汁的重量之和计，每克添加3×10⁸CFU活菌数的富硒锌酵母。 [0017]第五方面，本发明提供所述的软糖的制备方法，包括以下步骤： [0018](1)原料混合：按比例将25～30份水、25～30份麦芽糖醇、25～30份麦芽糖浆、8～12份浓缩果汁混合均匀，得到原料混合物； [0019](2)熬煮：将所述原料混合物加热熬煮至102～106℃时停止加热，并加入预先冷水浸泡的6～8份明胶，得到熬煮液； [0020](3)调酸：当所述熬煮液温度降至60～80℃时，加入0.3～0.5份柠檬酸和0.1～0.2份柠檬酸钠，得到酸性熬煮液； [0021](4)浇模：当所述酸性熬煮液的温度降至50～60℃时加入富硒锌酵母的菌液，混匀，然后浇注在模具上冷却，其中，以水、麦芽糖醇、麦芽糖浆和浓缩果汁的重量之和计，每克添加1×10⁸～5×10⁸CFU活菌数的富硒锌酵母； [0022](5)脱模干燥：软糖成型后，将其从模具中脱出，干燥。 [0023]进一步地，步骤(1)中，水、麦芽糖醇、麦芽糖浆、浓缩果汁的重量份数分别为30份、30份、30份、10份；步骤(2)中，明胶的重量份数为7.5份；步骤(3)中，柠檬酸和柠檬酸钠的重量份数分别为0.4份和0.1份；步骤(4)中，以水、麦芽糖醇、麦芽糖浆和浓缩果汁的重量之和计，每克添加3×10⁸CFU活菌数的富硒锌酵母。 [0024]本发明技术方案，具有如下优点： [0025]1、本发明提供的酿酒酵母不仅可以同时将无机硒锌转化为有机硒锌，还具有抗高温和抗酸碱性。具体而言，酿酒酵母mei2101.1在同时富集硒和锌时，生物量是2.58mg/L，硒富集量为1.99mg/g，锌富集量为48.80mg/g，富集硒锌能力强，可减少培养基用料，节约生产成本；酿酒酵母mei2101.1具有优良的抗逆性，可以耐50～60℃高温、耐pH为4.5～5.6酸性和耐pH为11～12碱性。 [0026]2、本发明提供的酿酒酵母在富硒锌培养基中培养得到富硒锌酵母，作为补硒剂和补锌剂添加到软糖中，可以抵抗软糖制作过程中高温和酸性环境对酵母活性的破坏，存活率为30.71～44.28％；软糖还可以对富硒锌酵母起到包埋作用，抗胃液和肠液消化的能力强，软糖含有的富硒锌酵母在模拟胃液中消化2h后存活率为24.71～36.84％，在模拟肠液中消化2h后存活率为46.91～68.82％；软糖中含有的富硒锌酵母活性高，使软糖富含硒锌，保持活性的酵母可以维持有机硒和有机锌的稳定，从而促进机体对硒锌的吸收，达到强化营养的效果。 附图说明 [0027]为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。 [0028]图1是本发明实施例2中酿酒酵母mei2101.1的生长曲线，其中，(a)为耐硒生长曲线，(b)为耐锌生长曲线； [0029]图2是本发明实施例3中酿酒酵母mei2101.1和商业酿酒酵母在不同温度条件下的生长曲线，其中，(a)为温度为50℃条件下的生长曲线；(b)为温度为60℃条件下的生长曲线； [0030]图3是本发明实施例3中酿酒酵母mei2101.1和商业酿酒酵母在不同pH值条件下的生长曲线，其中，(a)为pH＝4.5条件下的生长曲线；(b)为pH＝5.6条件下的生长曲线；(c)为pH＝11条件下的生长曲线；(d)为pH＝12条件下的生长曲线； [0031]图4是本发明实施例5中制备的软糖成品图； [0032]图5是本发明实施例5中软糖制备前后酿酒酵母活性变化的显微图，其中，a₁为商业酿酒酵母软糖对照组，a₂为50℃商业酿酒酵母软糖，a₃为60℃商业酿酒酵母软糖，b₁为富硒锌酵母软糖对照组，b₂为50℃富硒锌酵母软糖，b₃为60℃富硒锌酵母软糖； [0033]图6是本发明实施例5中软糖消化前后酿酒酵母数量变化显微图，其中，a₁、b₁、c₁、d₁分别是未消化的50℃商业酿酒酵母软糖、60℃商业酿酒酵母软糖、50℃富硒锌酵母软糖、60℃富硒锌酵母软糖；a₂、b₂、c₂、d₂分别是在模拟胃液消化2h后的50℃商业酿酒酵母软糖、60℃商业酿酒酵母软糖、50℃富硒锌酵母软糖、60℃富硒锌酵母软糖；a₃、b₃、c₃、d₃分别是在模拟肠液消化2h后的50℃商业酿酒酵母软糖、60℃商业酿酒酵母软糖、50℃富硒锌酵母软糖、60℃富硒锌酵母软糖。 具体实施方式 [0034]提供下述实施例是为了更好地进一步理解本发明，并不局限于所述最佳实施方式，不对本发明的内容和保护范围构成限制，任何人在本发明的启示下或是将本发明与其他现有技术的特征进行组合而得出的任何与本发明相同或相近似的产品，均落在本发明的保护范围之内。 [0035]本发明实施例中酵母浸出粉胨葡萄糖培养基(海博生物技术有限公司，HB5193-1)，由如下组分组成：蛋白胨20g、葡萄糖20g、酵母浸粉10g，pH 6.5±0.2，其配制方法如下：称取本品50.0g，加热溶解于1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15分钟后备用。 [0036]本发明实施例中马铃薯葡萄糖琼脂培养基(Solarbio公司，P8931-250g)由如下组分组成：马铃薯浸粉6g、琼脂20g、葡萄糖20g，pH 5.6±0.2，其配制方法如下：称取本品46g，加热溶解于1000mL蒸馏水中，115℃高压灭菌20分钟后备用。 [0037]本发明实施例中孟加拉红培养基(上海盛思生化科技有限公司，MSS009)由如下组分组成：蛋白胨5g、葡萄糖10g、磷酸二氢钾1g、硫酸镁0.5g、孟加拉红0.033g、琼脂20g、氯霉素0.1g，pH 7.0～7.4，其配制方法如下：取本品36.6g，加蒸馏水1000mL，浸泡数分钟，加热煮沸至完全溶解，分装，经121℃高压灭菌15分钟后备用。 [0038]本发明实施例中商业酿酒酵母为安琪高活性干酵母，产自安琪酵母股份有限公司。 [0039]实施例中未注明具体实验步骤或条件者，按照本领域内的文献所描述的常规实验步骤的操作或条件即可进行。所用原料或仪器，均为可以通过市购获得的常规产品，包括但不限于本申请实施例中采用的原料或仪器。 [0040]实施例1酿酒酵母mei2101.1的分离与鉴定 [0041]1、菌株分离 [0042]酿酒酵母mei2101.1是从江西省丰城市洛市镇一片种植水果蔬菜的高富硒区域采集土壤样品中筛选出来的。筛选得到该菌株的方法如下：将采集到的土壤样品过筛粉碎、混合均匀，称取20g，加入到180mL含有1mg/L亚硒酸钠(Na₂SeO₃)的酵母浸出粉胨葡萄糖培养基中，放置于28℃、180r/min摇床孵育4h，静置30min；取1mL土壤悬液加入到灭菌的9mL0.85％的生理盐水中，将其稀释至10^-1和10^-2，取100μL稀释液分别涂布于含有150mg/L亚硒酸钠的马铃薯葡萄糖琼脂培养基固体平板上，倒扣放置于30℃下培养至菌落长出，挑取具有不同菌落形态特征、颜色为白色或粉色的单个菌落，采用平板划线法进行重复分离纯化，获得菌株纯培养物；挑取一环筛选得到的单菌落，加入至10mL酵母浸出粉胨葡萄糖培养基中，制成种子液，取得到的种子液50μL接种在亚硒酸钠浓度分别为0、30、60、120和240mg/L的梯度马铃薯葡萄糖琼脂固体培养基中，在28℃条件下，培养12h，观察其长势情况、菌落颜色，从而筛选得到一株生长旺盛、耐硒能力强的菌株，即目标菌株。 [0043]2、菌株鉴定 [0044]将筛选得到的菌株用试剂盒进行DNA提取，并且进行PCR扩增，然后送至上海生工进行基因测序。将测序结果通过BLAST工具在NCBI的进行同源序列比对，明确菌株的种属关系，该菌株确认为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。 [0045]该菌株的16S rDNA序列如SEQ ID NO.1所示： [0046]TATGCAGCATCCTTGACTTACGTCGCAGTCCTCAGTCCCAGCTGGCAGTATTCCCACAGGCTATAATACTTACCGAGGCAAGCTACATTCCTATGGATTTATCCTGCCACCAAAACTGATGCTGGCCCAGTGAAATGCGAGATTCCCCTACCCACAAGGAGCAGAGGGCACAAAACACCATGTCTGATCAAATGCCCTTCCCTTTCAACAATTTCACGTACTTTTTCACTCTCTTTTCAAAGTTCTTTTCATCTTTCCATCACTGTACTTGTTCGCTATCGGTCTCTCGCCAATATTTAGCTTTAGATGGAATTTACCACCCACTTAGAGCTGCATTCCCAAACAACTCGACTCTTCGAAGGCACTTTACAAAGAACCGCACTCCTCGCCACACGGGATTCTCACCCTCTATGACGTCCTGTTCCAAGGAACATAGACAAGGAACGGCCCCAAAGTTGCCCTCTCCAAATTACAACTCGGGCACCGAAGGTACCAGATTTCAAATTTGAGCTTTTGCCGCTTCACTCGCCGTTACTAAGGCAATCCCGGTTGGTTTCTTTTCCTCCGCTCCC [0047]实施例2酿酒酵母mei2101.1的耐硒锌和富硒锌能力测定 [0048]1、酿酒酵母mei2101.1的耐硒锌浓度范围测定 [0049](1)耐硒浓度范围测定方法 [0050]如实施例1所述，目标菌株是将种子液接种在亚硒酸钠浓度分别为0、30、60、120和240mg/L的梯度马铃薯葡萄糖琼脂固体培养基中培养和筛选得到的，其对硒的耐受情况如表1所示。 [0051](2)耐锌浓度范围测定方法 [0052]将实施例1中筛选得到的酿酒酵母mei2101.1接种到10mL酵母浸出粉胨葡萄糖培养基中，制成种子液，28℃培养12h，取得到的种子液50μL接种在氯化锌浓度分别为0、200、300、400和500mg/L的马铃薯葡萄糖琼脂固体培养基中，在28℃条件下，培养12h，观察其长势情况，其结果如表1所示。 [0053](3)结果 [0054]表1酿酒酵母mei2101.1对硒和锌的耐受情况 [0055] [0056]注：+代表菌株的长势情况，+越多代表长势越好。 [0057]如表1所示，酿酒酵母mei2101.1能够耐受0～240mg/L亚硒酸钠浓度，耐硒能力强，并且该菌株能够耐受0～500mg/L氯化锌浓度，耐锌能力强。 [0058]2、酿酒酵母mei2101.1的耐硒锌生长曲线测定 [0059](1)耐硒生长曲线的测定方法 [0060]将实施例1筛选得到的酿酒酵母mei2101.1接种到酵母浸出粉胨葡萄糖培养基中活化12h，进行10^-1～10^-10梯度系列稀释涂布，挑选单菌落分散均匀的平板进行计数，然后根据形成的菌落数、稀释倍数推算培养基活菌数。将活化的菌液稀释到活菌数大概为1×10⁵CFU/mL，然后取200μL菌液分别加入到亚硒酸钠浓度为0、30、60、120和240mg/L的孔板中，用酶标仪进行生长曲线的测定，检测波长为600nm，其结果如图1a所示。 [0061](2)耐锌生长曲线的测定方法 [0062]将实施例1筛选得到的酿酒酵母mei2101.1接种到酵母浸出粉胨葡萄糖培养基中活化12h，进行10^-1～10^-10梯度系列稀释涂布，挑选单菌落分散均匀的平板进行计数，由单个细胞生长繁殖并形成肉眼可见的菌落，然后根据形成的菌落数、稀释倍数推算培养基活菌数。将活化的菌液稀释到活菌数大概为1×10⁵CFU/mL，然后取200μL菌液分别加入到氯化锌浓度分别为0、200、300、400和500mg/L的的孔板中，用酶标仪进行生长曲线的测定，其结果如图1b所示。 [0063](3)结果 [0064]如图1所示，酿酒酵母mei2101.1能够在亚硒酸钠浓度为0～240mg/L的环境中生长，并且该菌株能够在氯化锌浓度为0～500mg/L的环境中生长。 [0065]3、酿酒酵母mei2101.1的富锌量、富硒量测定 [0066](1)富集硒时富集量的测定方法 [0067]①富硒培养基制备：在酵母浸出粉胨葡萄糖培养基中加入亚硒酸钠，使其浓度为60mg/L，培养基经过灭菌、冷却备用； [0068]②接种与培养：在无菌条件下，将酿酒酵母mei2101.1接入富硒培养基中，在28℃下培养24h； [0069]③收集菌丝体：经过富集培养的菌体在8000rpm离心10min后收集，用生理盐水洗涤3次，干燥称重； [0070]④富硒量测定：按照《GB 5009.93-2017》食品安全国家标准食品中氢化物原子荧光光谱法测定菌体中硒的含量，其结果如表2所示。 [0071](2)富集锌时富集量的测定方法 [0072]①富锌培养基制备：在酵母浸出粉胨葡萄糖培养基中加入氯化锌，使其浓度为300mg/L，培养基经过灭菌、冷却备用； [0073]②接种与培养：在无菌条件下，将酿酒酵母mei2101.1接入富锌培养基中，在28℃下培养24h； [0074]③收集菌丝体：经过富集培养的菌体在8000rpm离心10min后收集，用生理盐水洗涤3次，干燥称重； [0075]④富锌量测定：按照国标GB 5009.14-2017食品中锌的测定中湿法消解菌体，用火焰原子吸收法测定菌体中锌的含量，其结果如表2所示。 [0076](3)同时富集硒锌时富集量的测定方法 [0077]①富硒锌培养基制备：在酵母浸出粉胨葡萄糖培养基中加入亚硒酸钠和氯化锌，使其浓度分别为60mg/L和300mg/L，培养基经过灭菌、冷却备用； [0078]②接种与培养：在无菌条件下，将酿酒酵母mei2101.1接入富硒锌培养基中，在28℃下培养24h； [0079]③收集菌丝体：经过富集培养的菌体在8000rpm离心10min后收集，用生理盐水洗涤3次，干燥称重； [0080]④富硒锌量测定：按照《GB 5009.93-2017》食品安全国家标准食品中氢化物原子荧光光谱法测定菌体中硒的含量；按照国标《GB 5009.14-2017》食品中锌的测定中湿法消解菌体，用火焰原子吸收法测定菌体中锌的含量，其结果如表2所示。 [0081](4)结果 [0082]表2酿酒酵母mei2101.1在富集培养基中的生物量和富集量 [0083] [0084]如表2所示，酿酒酵母mei2101.1在单独富集硒和锌时，生物量分别是1.98mg/L和4.13mg/L，富集量分别高达1.71mg/g和40.25mg/g，而在同时富集硒和锌时，生物量是2.58mg/L，硒富集量为1.99mg/g，锌富集量为48.80mg/g，证明酿酒酵母mei2101.1具有同时高效富集硒锌的能力。 [0085]实施例3酿酒酵母mei2101.1的抗逆性分析 [0086]1、对高温的抗逆性分析 [0087]将酿酒酵母mei2101.1接种于装有50mL酵母浸出粉胨葡萄糖培养基的锥形瓶中，于28℃恒温摇床培养箱中活化培养至对数期，将活化后的菌液接种至酵母浸出粉胨葡萄糖培养基中，分别在50℃和60℃的温度下培养，用酶标仪每隔1小时测一次在600nm波长下的吸光度(3次独立重复)，根据其吸光度值变化绘制酿酒酵母mei2101.1的生长曲线，并以商业酿酒酵母作为对照组，其结果如图2所示。在温度为50℃时，酿酒酵母mei2101.1的生长曲线先上升后趋于稳定，而在温度为60℃时，酿酒酵母mei2101.1的生长曲线则一直上升，这说明酿酒酵母mei2101.1在50℃和60℃高温培养下仍然可以生长。并且无论温度为50或60℃时，酿酒酵母mei2101.1的生长曲线一直高于商业酿酒酵母，这进一步说明酿酒酵母mei2101.1具有较高的抗高温能力。 [0088]2、对酸碱性的抗逆性分析 [0089]将酿酒酵母mei2101.1接种于装有50mL酵母浸出粉胨葡萄糖培养基的锥形瓶中，于28℃恒温摇床培养箱中活化培养至对数期，将活化后的菌液接种至不同pH(4.5、5.6、11、12)的酵母浸出粉胨葡萄糖培养基中，在28℃下持续培养20h，用酶标仪每隔1小时测一次在600nm波长下的吸光度(3次独立重复)，根据其吸光度值变化绘制酿酒酵母mei2101.1的生长曲线，并以商业酿酒酵母作为对照组，其结果如图3所示。在pH为4.5或5.6的酸性条件下，酿酒酵母mei2101.1的生长曲线先上升后趋于稳定，而在pH为11或12的碱性条件下，酿酒酵母mei2101.1的生长曲线先上升后略微下降，这表明酿酒酵母mei2101.1在酸性或碱性的环境中仍然能够生长。并且无论生长环境为酸性或碱性时，酿酒酵母mei2101.1的生长曲线一直高于商业酿酒酵母，这进一步说明酿酒酵母mei2101.1具有较高的抗酸碱能力。 [0090]实施例4酿酒酵母mei2101.1在制备富硒锌酵母中的应用 [0091]本实施例提供利用酿酒酵母mei2101.1制备富硒锌酵母的方法： [0092]在无菌条件下，将酿酒酵母mei2101.1接入富硒锌培养基中，在28℃下培养24h，经过富集培养的菌体在8000rpm离心10min后收集菌泥，即为富硒锌酵母； [0093]富硒锌培养基的制备方法如下：在酵母浸出粉胨葡萄糖培养基中加入亚硒酸钠和氯化锌，使其浓度分别为60mg/L和300mg/L，培养基经过灭菌、冷却备用。 [0094]实施例5富硒锌酵母在制备软糖中的应用 [0095]1、软糖的制备 [0096]软糖制备步骤： [0097](1)原料混合：按比例将30g水、30g麦芽糖醇、30g麦芽糖浆、10g浓缩百香果汁通过搅拌器混合均匀，得到原料混合物； [0098](2)熬煮：将原料混合物加热熬煮至106℃时停止加热，并加入预先冷水浸泡的7.5g份明胶，得到熬煮液； [0099](3)调酸：当熬煮液温度降至80℃时，加入0.4g柠檬酸和0.1g柠檬酸钠，得到酸性熬煮液； [0100](4)浇模：当酸性熬煮液的温度降至60℃时加入富硒锌酵母的菌液(每克原料混合物加入富硒锌酵母的活菌数为3×10⁸CFU，该菌液由实施例4制备的菌泥加水配制而成，配制所得富硒锌酵母的菌液中活菌数为3.9×10⁹CFU/mL)，混匀，然后浇注在模具上冷却； [0101](5)脱模干燥：软糖成型后，将其从模具中脱出，放进烘房中干燥； [0102](6)包装：将干燥好的软糖密封包装。 [0103]按此方法制备的软糖成品如图4所示。 [0104]2、酿酒酵母活性在软糖制备过程中的变化情况 [0105](1)实验样品 [0106]商业酿酒酵母软糖对照组：按照前述第1部分记载的用量将水、麦芽糖醇、麦芽糖浆、浓缩百香果汁、明胶、柠檬酸和柠檬酸钠混合均匀，再加入商业酿酒酵母的菌液(按照富硒锌酵母的活菌数同等数量替代)； [0107]50℃商业酿酒酵母软糖：参照前述第1部分的软糖制备方法，不同之处仅在于，利用商业酿酒酵母的菌液替代富硒锌酵母的菌液(按照活菌数同等数量替代)，并且浇模温度为50℃； [0108]60℃商业酿酒酵母软糖：参照前述第1部分的软糖制备方法，不同之处仅在于，利用商业酿酒酵母的菌液替代富硒锌酵母的菌液(按照活菌数同等数量替代)，并且浇模温度为60℃； [0109]前述商业酿酒酵母的菌液的配制方法如下：将商业酿酒酵母粉接种到酵母浸出粉胨葡萄糖培养基中活化12h，进行10^-1～10^-10梯度系列稀释涂布，挑选单菌落分散均匀的平板进行计数，然后根据形成的菌落数、稀释倍数推算培养基活菌数，将活化的菌液稀释到活菌数为3.9×10⁹CFU/mL。 [0110]富硒锌酵母软糖对照组：按照前述第1部分记载的用量将软糖制备过程中加入的各原料(水、麦芽糖醇、麦芽糖浆、浓缩百香果汁、明胶、柠檬酸、柠檬酸钠、富硒锌酵母的菌液)混合均匀； [0111]50℃富硒锌酵母软糖：参照前述第1部分的软糖制备方法，浇模温度为50℃； [0112]60℃富硒锌酵母软糖：参照前述第1部分的软糖制备方法，浇模温度为60℃。 [0113](2)软糖中酿酒酵母的显微观察 [0114]商业酿酒酵母软糖对照组和富硒锌酵母软糖对照组：取5g对照组样品与15mL生理盐水混合，然后用高速分散机搅拌均匀，取1滴混合液体置于载玻片中，用盖玻片盖好。 [0115]50℃商业酿酒酵母软糖、60℃商业酿酒酵母软糖、50℃富硒锌酵母软糖、60℃富硒锌酵母软糖：将软糖切块后，取5g样品与15mL生理盐水混合，然后用高速分散机搅拌均匀，取1滴混合液体置于载玻片中，用盖玻片盖好。 [0116]将制备好的样本置于显微镜下(400倍)，观察酿酒酵母，其结果如图5所示(图中椭圆形的物质即为酿酒酵母)。 [0117]如图5所示，对照组中的酿酒酵母数量(图5a₁，b₁)高于软糖中酿酒酵母数量(图5a₂，a₃，b₂，b₃)，说明软糖的制备过程会对酿酒酵母活性产生破坏，这与软糖在制备过程中需要加热和调酸有关。在浇模温度为50℃时的软糖中(图5a₃，b₃)酿酒酵母数量比浇模温度为60℃时的软糖中(图5a₂，b₂)的要高，说明浇模温度越高对酵母菌活性的破坏作用越大。添加商业酿酒酵母的软糖中酵母菌数量低于添加富硒锌酵母的软糖，说明富硒锌酵母在软糖中的活性比商业酿酒酵母大。 [0118](3)软糖在制备前后酿酒酵母活性的测定 [0119]50℃商业酿酒酵母软糖、60℃商业酿酒酵母软糖、50℃富硒锌酵母软糖、60℃富硒锌酵母软糖：将软糖切块后，取5g样品与15mL生理盐水混合，然后将混合液体进行10^-1～10^-6梯度系列稀释涂布于孟加拉红培养基中，在28℃下培养24h，挑选单菌落分散均匀的平板进行计数，然后根据形成的菌落数、稀释倍数推算培养基活菌数。分别以商业酿酒酵母软糖对照组、富硒锌酵母软糖对照组中实际测得的活菌数作为对照。其结果如表3所示。在相同的制备条件下，富硒锌酵母在软糖制备前后的存活率为30.71～44.28％，显著高于商业酿酒酵母在软糖制备前后的存活率，即21.92～27.20％，由此说明富硒锌酵母比商业酿酒酵母更能抵抗热和酸性环境对其活性的破坏，这与富硒锌酵母具有高耐热和耐酸的抗逆性有关。 [0120]表3软糖在制备前后酿酒酵母活性的变化 [0121] [0122]3、软糖在模拟胃液和肠液中的消化情况 [0123](1)实验样品 [0124]同前述第2部分。 [0125](2)配制模拟胃液和肠液 [0126]模拟胃液由2mg/mL NaCl、7mL/L HCl、和3.2mg/mL胃蛋白酶溶液组成，pH值为3.0； [0127]模拟肠液由36.7mg/mL CaCl·2H₂O、218.7mg/mL NaCl、24mg/mL脂肪酶和54mg/mL胆盐溶液组成，pH值为8.0。 [0128](3)模拟胃消化 [0129]将软糖切块后，取5g样品与15mL模拟胃液混合后于37℃恒温摇床水浴(100r/min)消化2h。 [0130](4)模拟肠消化 [0131]将软糖切块后，取5g样品与15mL模拟肠液混合后于37℃恒温摇床水浴(100r/min)消化2h。 [0132](5)软糖消化液的显微观察 [0133]将消化完的液体取一滴置于载玻片上，用盖玻片盖好，在显微镜下(400倍)观察消化液中酿酒酵母的数量，以未进行消化的软糖作为对照组，其结果如图6所示。与对照组(a₁、b₁、c₁、d₁)相比，软糖在模拟胃液(a₂、b₂、c₂、d₂)和肠液(a₃、b₃、c₃、d₃)中消化后，酿酒酵母数量减少，但是软糖在肠液中消化时保留的酿酒酵母数量更多，说明软糖中的酿酒酵母在肠液消化时的存活率比在胃液中更高。 [0134](6)软糖中酿酒酵母活菌数的测定 [0135]将消化完的液体用生理盐水进行10^-1～10^-6梯度系列稀释涂布于孟加拉红培养基中，在28℃下培养24h，挑选单菌落分散均匀的平板进行计数，然后根据形成的菌落数、稀释倍数推算培养基活菌数。以软糖在消化前的实际测得的活菌数作为对照组。其结果如表4所示，软糖中富硒锌酵母在胃液中的存活率为24.71～36.84％，在肠液中的存活率为46.91～68.82％，远高于软糖中商业酿酒酵母的存活率。这与富硒锌酵母具有强耐高温和耐酸碱的抗逆性有关。 [0136]表4软糖在模拟胃液和肠液中消化前后的活菌数 [0137] [0138]显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。