CN115053810B 有效 一种同时提高人参不定根中多种人参皂苷含量的培养方法
1.一种同时提高人参不定根中多种人参皂苷含量的培养方法,其特征在于,该方法包括以下步骤:
步骤S1、外植体消毒;
步骤S2、愈伤组织诱导;
步骤S3、不定根的诱导;
步骤S4、不定根中期培育:采用SH培养基在低温下进行液体悬浮培养;
步骤S5、不定根培育:超净工作台中将步骤S4培育的不定根接种到一个已灭菌的生物反应器中,生物反应器中采用SH培养基,所述SH培养基包括3/4SH、3%蔗糖、5PPMIBA、3.5N的NaOH 1mL;
培养时,开启空气阀,控制通气量为0.3-0.6vvm,温度23-25℃,湿度30-50%,培养3周;之后打开臭氧阀,通入空气与臭氧的混合气体,通气量为0.3-0.6vvm,臭氧浓度为0.15-0.2mg/m3,温度23-25℃,湿度30-50%,培养1周。
2.根据权利要求1所述的一种同时提高人参不定根中多种人参皂苷含量的培养方法,其特征在于,步骤S1外植体消毒的具体操作步骤如下:在自来水下冲洗人参,放在干净的白钢桶中,装入一定量的乙醇,乙醇浓度为70%,乙醇的量使人参完全浸没,浸泡清洗1-3min;然后利用事先灭菌的无菌水洗涤,洗去人参表面残留的乙醇溶液,之后转移至超净工作台中,把人参浸泡在浓度为2%的NaClO溶液中,浸泡时间为15-20min。
3.根据权利要求1所述的一种同时提高人参不定根中多种人参皂苷含量的培养方法,其特征在于,步骤S2愈伤组织诱导时采用易于诱导愈伤组织的MS培养基,所述MS培养基中添加生长素、细胞分裂素、蔗糖,所述生长素为2,4-二氯苯氧乙酸,细胞分裂素为6-苄基氨基嘌呤,生长素添加量为1PPM,细胞分裂素添加量为0.5PPM,蔗糖的浓度为30g/L;培养条件为:温度23-25℃、湿度30-50%、光照时间Light:8h,Dark:16h。
4.根据权利要求1所述的一种同时提高人参不定根中多种人参皂苷含量的培养方法,其特征在于,步骤S3诱导不定根的培养基采用MS培养基,所述MS培养基中添加生长激素IBA、蔗糖,所述生长激素IBA的添加量为2PPM,蔗糖的浓度为30g/L;培养条件为:温度23-25℃、湿度30-50%、暗培,诱导出不定根。
5.根据权利要求1所述的一种同时提高人参不定根中多种人参皂苷含量的培养方法,其特征在于,步骤S4不定根中期培育时,所述SH培养基包括3/4SH、3%蔗糖、3PPMIBA、0.5PPM萘乙酸、0.3PPM激动素;培养条件为:温度23-25℃,湿度40%,培养3天;温度20-22℃,湿度35%,培养3天;温度17-19℃,湿度35%,培养3天;温度14-16℃,湿度30%,培养4天;温度11-13℃,湿度30%,培养4天,温度8-10℃,湿度30%,培养4天;全部为暗培。
6.根据权利要求1所述的一种同时提高人参不定根中多种人参皂苷含量的培养方法,其特征在于,步骤S5所述的生物反应器的顶端设置有排气口,生物反应器的底部设置有进气口,所述进气口通过分管路与总进气管路连接,所述分管路上设置有进气阀;所述总进气管路与臭氧进气管路和空气进气管路连接,所述臭氧进气管路上安装有臭氧阀、第一流量计,臭氧进气管路与臭氧发生器连接;所述空气进气管路与气源连接,空气进气管路上安装有空气阀、第二流量计。
现在,一起体验智慧芽的产品和服务
自动注册,无需人工审核,即可立即开始查询专利
立即注册
澳门正版图库

AI助手