本发明公开了内切葡聚糖酶突变体TrepCel4‑Aa及其应用。所述内切葡聚糖酶突变体TrepCel4‑Aa的氨基酸序列如SEQ ID No.4所示，其是由氨基酸序列为SEQ ID No.1的内切葡聚糖酶的第201位的组氨酸突变为色氨酸以及第252位的谷氨酸突变为酪氨酸获得的，且编码该突变体的基因的核苷酸序列如SEQ IDNo.5所示。所述内切葡聚糖酶突变体TrepCel4‑Aa只包含一个糖苷水解酶家族5的模块区，并在大肠杆菌中成功表达，纯化后的酶液活性好，对天然木质纤维素具有很好的水解能力，不仅丰富了内切葡聚糖酶的菌种来源，在提高饲料纤维的消化率、改善动物生产性能方面具有理论上的指导意义。