CN113481110B
有效
一种玉木耳富硒培养物的制作方法和用途
技术领域
[0001]本发明属于饲料领域，尤其涉及一种玉木耳富硒培养物(饲料)的制作方法和用途。
背景技术
[0002]现在在动物培育过程中通常会添加富硒饲料。以使得动物肉中，例如猪肉中富含硒元素，以补充人体中的硒。例如专利201810432340.X公开的一种富硒猪肉以及富硒猪的喂养方法。但是采用富硒饲料饲喂猪，可能会导致对猪生长产生负面影响，如可能会影响其猪生长缓慢，影响猪肉品质等，因此需要一种开发一种富硒饲料，并确定其对猪生长即品质的影响，并确定其用量。
发明内容
[0003]为解决上述问题，本发明公开了一种玉木耳富硒培养物的制作方法和用途。本发明制得玉木耳富硒培养物可以增加猪的料重比、提高猪肉抗氧化能力、猪肌肉硒含量和提高猪肉氧化稳定性。
[0004]为实现上述目的，本发明的技术方案为：
[0005]一种玉木耳富硒培养物的制作方法，包括如下步骤：
[0006]步骤一、制作玉木耳富硒培养物液体培养基；
[0007]步骤二、制作玉木耳富硒培养物固体培养基；
[0008]步骤三、在玉木耳富硒培养物液体培养基中接种玉木耳菌丝体(Auriculariacornea)发酵至预设时间，得到培养好的玉木耳液体菌种；
[0009]步骤四、将培养好的玉木耳液体菌种接种并混合到玉木耳富硒培养物固体培养基发酵至预设时间后低温干燥得到玉木耳富硒培养物。
[0010]进一步的改进，所述玉木耳富硒培养物液体培养基包括以质量百分比计的亚硒酸钠0.003％，葡萄糖3％，玉米粉2％，KH2PO40.25％，MgSO40.15％，其余为水。
[0011]进一步的改进，所述玉木耳富硒培养物固体培养基的制作方法如下：将主料和辅料混合的得到混合料，主料包括以质量百分比计的麦麸85％，玉米粉15％；辅料为亚硒酸钠，辅料重量为主料重量的0.003％；混合料在120℃条件下灭菌1小时，然后，通入无菌水，冷却即得到玉木耳富硒培养物固体培养基，玉木耳富硒培养物固体培养基内发酵水分控制在60％。
[0012]进一步的改进，所述步骤三中，玉木耳菌丝体(Auricularia cornea)的接种量为10g/L，发酵条件为：在25℃条件下，180RPM转速下，发酵7天。
[0013]进一步的改进，所述步骤四中，玉木耳液体菌种以10％接种量与玉木耳富硒培养物固体培养基混合，然后在27℃以及60％相对湿度条件下发酵15天。
[0014]一种上述玉木耳富硒培养物的用途，其特征在于，所述玉木耳富硒培养物用于作为增加猪生长性能及猪肉品质的饲料添加剂。
[0015]进一步的改进，所述玉木耳富硒培养物用于作为增加猪料重比、提高猪肉抗氧化能力、猪肌肉硒含量和提高猪肉氧化稳定性的饲料添加剂。
[0016]进一步的改进，所述玉木耳富硒饲料还用于作为提高猪肉中的丁酸含量、提高猪结肠MCT1 mRNA表达量，提高猪血清和肝脏中的GSH-Px含量和降低肝脏MDA含量的饲料添加剂。
[0017]进一步的改进，所述玉木耳富硒培养物的加入量为总饲料重量的1.2-2.4％。
[0018]本发明的优点：
[0019]本发明制得玉木耳富硒培养物可以增加猪的料重比、提高猪肉抗氧化能力、猪肌肉硒含量和提高猪肉氧化稳定性。
附图说明
[0020]图1为分别饲喂对照饲粮和添加0.6％、1.2％和2.4％(SAC)饲粮的猪结肠MCT1mRNA相对表达量的变化图。
具体实施方式
[0021]以下结合附图及实施例对本发明做进一步说明。
[0022]实施例1
[0023]制备玉木耳富硒培养物，步骤如下：
[0024]制备玉木耳富硒培养物液体培养基：亚硒酸钠0.003％，葡萄糖3％，玉米粉2％，KH2PO40.25％，MgSO40.15％。然后接种10g/L的玉木耳菌丝体(Auricularia cornea)，在25摄氏度条件下，180RPM转速下，发酵7天。
[0025]制备固体培养基：麦麸85％，玉米粉15％，然后加入0.003％的亚硒酸钠。在120度条件下灭菌1小时，然后，通入无菌水，冷却后待用。发酵水分控制在60％。
[0026]培养好的玉木耳液体菌种，以10％接种量与固体培养基相混合，在27摄氏度及60％相对湿度条件下发酵15天。
[0027]然后通过低温干燥设备(温度控制≤55℃)干燥后，即得玉木耳富硒培养物成品。检测分析玉木耳富硒培养物(SAC)的营养物质。
[0028]表1玉木耳富硒培养物玉木耳富硒培养物营养物质分析
[0029]
[0030]
[0031]玉木耳富硒培养物
[0032]一、玉木耳富硒培养物对生长肥育饲喂试验：
[0033]96头三元杂交生长肥育猪，随机分为4个处理，每个处理6个重复。4个处理分别饲喂对照饲粮和添加了0.6％、1.2％和2.4％玉木耳富硒培养物的试验日粮。所有日粮均满足NRC(2012)的营养需求。试验期为45天。环境温度控制在25-28℃。试验分为两个阶段:生长阶段(第1阶段:0-23天)和育肥阶段(第2阶段:24-45天)。分别于试验的第0、23和45天称重并记录日采食量和体重，测定平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)和料肉比(F/G)。第45天，取得血清样品和鲜粪样品，用于血清生化指标和短链脂肪酸检测。
[0034]试验结束时，选取24头猪(每栏1头，每个处理6头)进行屠宰试验。禁食(12h)后，进行屠宰。取结肠组织标本，-80℃保存，用于mRNA表达分析。取胴体右半部分第10-12肋间背最长肌(LDM)(约200g)、肝、肾组织，立即置于-20℃保存，用于肉质评价。
[0035]表2试验日粮组成
[0036]
[0037]
[0038]化学分析与计算：
[0039]对样品进行粗脂肪(EE)、干物质(DM)、粗蛋白质(CP)、灰分、总磷和钙的检测。中性洗涤纤维(NDF)和酸性洗涤纤维(ADF)含量采用纤维分析仪(2010,FOSS，丹麦)测定。使用氧弹量热计(C2000,IKA，德国)测量饲粮、粪便和尿液中的总能(GE)。采用电感耦合等离子光谱(ICP-MS,Thermo,USA)对硒含量进行定量。根据Wu et al.(2017)采用离子色谱法(883,Metrohm，瑞士)分析短链脂肪酸(SCFA)的浓度。采用商用检测试剂盒检测抗氧化指标谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和总抗氧化能力(T-AOC)。采用日本日立3100全自动生化分析仪，及相关试剂盒测定血清高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、葡萄糖(GLU)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)水平。
[0040]胴体性状和肉质测定：
[0041]胴体长度、胴体重量、大理石纹、眼肌面积、背膘厚、热胴体重等测定方法参照《瘦肉型猪胴体性状测定技术规范NY/T 825-2004》
[0042]随后检测肉质指标，包括肉色、pH值、剪切力、蒸煮损失和滴水损失。
[0043]MCT1 mRNA表达的相对表达量：单羧酸转运体1(MCT1)mRNA表达量采用RT-PCR方法进行分析。MCT1和β-actin的引物，如表3所示。
[0044]表3引物信息
[0045]
[0046]鲜肉模拟零售陈列时的氧化稳定性：
[0047]选取24个鲜肉样品。然后，将2.5厘米厚、无骨、切得很整齐的鲜肉分别放在泡沫塑料托盘上，再用透气的聚氯乙烯薄膜包裹起来。随后，所有包装好的样品都储存在一个开放的顶部展示箱中，温度保持在4℃和连续灯照明条件下(TLD-T836 W,6200K)。在第0、3和6天，取得10g左右样品进行MDA含量分析。
[0048]数据分析：
[0049]采用9.2版SAS(SAS Inst.Inc.，USA)软件对生肉生长性能、血清生化指标、短链脂肪酸、肉品质、组织硒浓度、MDA含量进行分析。P<0.05被认为具有统计学意义。
[0050]试验结果：
[0051]表4玉木耳硒培养物对生长育肥猪生长性能影响
[0052]
[0053]如表4所示，试验第1-23天，添加SAC的猪料重比(p<0.05)显著低于对照组。试验第24-45天，添加1.2％和2.4％SAC的猪料重比显著高于对照组和添加0.6％SAC的猪料重比(p<0.01)。在整个试验期内，1.2％和2.4％SAC处理的平均日增重高于对照组(p<0.05)，0.6％、1.2％和2.4％SAC处理的料重比低于对照组(p<0.05)。
[0054]从表5可知，与对照组相比，日粮中添加SAC显著提高了45天的丁酸浓度(p<0.05)。
[0055]表5玉木耳富硒培养物对鲜粪中短链脂肪酸影响
[0056]
[0057]
[0058]图1玉木耳富硒培养物对结肠MCT1 mRNA表达量的影响
[0059]如图1所示，1.2％和2.4％SAC饲粮的猪结肠MCT1 mRNA表达量(P＝0.04)高于对照组。
[0060]表6玉木耳富硒培养物对血清生化指标影响
[0061]
[0062]由表6可知，1.2％和2.4％SAC组第45天GSH-Px含量显著高于对照组(p<0.05)。
[0063]表7玉木耳富硒培养物对肝脏和背最长肌抗氧化指标影响
[0064]
[0065]由表7可知，饲粮中添加2.4％SAC显著提高了肝脏GSH-Px含量(p<0.05)，添加1.2％和2.4％SAC显著降低了肝脏MDA含量(p<0.05)。2.4％处理组的GSH-Px活性显著高于对照组(p<0.05)。
[0066]表8玉木耳富硒培养物对组织硒含量的影响
[0067]
[0068]
[0069]从表8可以看到，与其他3个处理相比，添加2.4％SAC的育肥猪LDM中硒含量更高(p<0.05)。饲喂SAC日粮的猪肝脏硒含量有升高趋势(p＝0.09)。
[0070]表9玉木耳富硒培养物对胴体性状和肉质的影响
[0071]
[0072]由表9可知，饲喂不同水平SAC对猪的胴体性状和肉品质没有影响。
[0073]表10玉木耳富硒培养物在模拟货架期试验中对鲜肉抗氧化状态影响
[0074]
[0075]由表10可知，模拟零售展示第6天，与对照组相比，2.4％SAC组的鲜肉MDA含量较低(p<0.05)。
[0076]综上所述，玉木耳富硒培养物在促进猪生长发育、提高抗氧化能力、肌肉硒含量和提高肉氧化稳定性方面效果较好。
[0077]本发明的实施方案已公开如上，但并不仅仅限于说明书和实施方案中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里所示出与描述的图例。
[0030]
[0031]玉木耳富硒培养物
[0032]一、玉木耳富硒培养物对生长肥育饲喂试验：
[0033]96头三元杂交生长肥育猪，随机分为4个处理，每个处理6个重复。4个处理分别饲喂对照饲粮和添加了0.6％、1.2％和2.4％玉木耳富硒培养物的试验日粮。所有日粮均满足NRC(2012)的营养需求。试验期为45天。环境温度控制在25-28℃。试验分为两个阶段:生长阶段(第1阶段:0-23天)和育肥阶段(第2阶段:24-45天)。分别于试验的第0、23和45天称重并记录日采食量和体重，测定平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)和料肉比(F/G)。第45天，取得血清样品和鲜粪样品，用于血清生化指标和短链脂肪酸检测。
[0034]试验结束时，选取24头猪(每栏1头，每个处理6头)进行屠宰试验。禁食(12h)后，进行屠宰。取结肠组织标本，-80℃保存，用于mRNA表达分析。取胴体右半部分第10-12肋间背最长肌(LDM)(约200g)、肝、肾组织，立即置于-20℃保存，用于肉质评价。
[0035]表2试验日粮组成
[0036]
[0037]
[0038]化学分析与计算：
[0039]对样品进行粗脂肪(EE)、干物质(DM)、粗蛋白质(CP)、灰分、总磷和钙的检测。中性洗涤纤维(NDF)和酸性洗涤纤维(ADF)含量采用纤维分析仪(2010,FOSS，丹麦)测定。使用氧弹量热计(C2000,IKA，德国)测量饲粮、粪便和尿液中的总能(GE)。采用电感耦合等离子光谱(ICP-MS,Thermo,USA)对硒含量进行定量。根据Wu et al.(2017)采用离子色谱法(883,Metrohm，瑞士)分析短链脂肪酸(SCFA)的浓度。采用商用检测试剂盒检测抗氧化指标谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和总抗氧化能力(T-AOC)。采用日本日立3100全自动生化分析仪，及相关试剂盒测定血清高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、葡萄糖(GLU)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)水平。
[0040]胴体性状和肉质测定：
[0041]胴体长度、胴体重量、大理石纹、眼肌面积、背膘厚、热胴体重等测定方法参照《瘦肉型猪胴体性状测定技术规范NY/T 825-2004》
[0042]随后检测肉质指标，包括肉色、pH值、剪切力、蒸煮损失和滴水损失。
[0043]MCT1 mRNA表达的相对表达量：单羧酸转运体1(MCT1)mRNA表达量采用RT-PCR方法进行分析。MCT1和β-actin的引物，如表3所示。
[0044]表3引物信息
[0045]
[0046]鲜肉模拟零售陈列时的氧化稳定性：
[0047]选取24个鲜肉样品。然后，将2.5厘米厚、无骨、切得很整齐的鲜肉分别放在泡沫塑料托盘上，再用透气的聚氯乙烯薄膜包裹起来。随后，所有包装好的样品都储存在一个开放的顶部展示箱中，温度保持在4℃和连续灯照明条件下(TLD-T836 W,6200K)。在第0、3和6天，取得10g左右样品进行MDA含量分析。
[0048]数据分析：
[0049]采用9.2版SAS(SAS Inst.Inc.，USA)软件对生肉生长性能、血清生化指标、短链脂肪酸、肉品质、组织硒浓度、MDA含量进行分析。P<0.05被认为具有统计学意义。
[0050]试验结果：
[0051]表4玉木耳硒培养物对生长育肥猪生长性能影响
[0052]
[0053]如表4所示，试验第1-23天，添加SAC的猪料重比(p<0.05)显著低于对照组。试验第24-45天，添加1.2％和2.4％SAC的猪料重比显著高于对照组和添加0.6％SAC的猪料重比(p<0.01)。在整个试验期内，1.2％和2.4％SAC处理的平均日增重高于对照组(p<0.05)，0.6％、1.2％和2.4％SAC处理的料重比低于对照组(p<0.05)。
[0054]从表5可知，与对照组相比，日粮中添加SAC显著提高了45天的丁酸浓度(p<0.05)。
[0055]表5玉木耳富硒培养物对鲜粪中短链脂肪酸影响
[0056]
[0057]
[0058]图1玉木耳富硒培养物对结肠MCT1 mRNA表达量的影响
[0059]如图1所示，1.2％和2.4％SAC饲粮的猪结肠MCT1 mRNA表达量(P＝0.04)高于对照组。
[0060]表6玉木耳富硒培养物对血清生化指标影响
[0061]
[0062]由表6可知，1.2％和2.4％SAC组第45天GSH-Px含量显著高于对照组(p<0.05)。
[0063]表7玉木耳富硒培养物对肝脏和背最长肌抗氧化指标影响
[0064]
[0065]由表7可知，饲粮中添加2.4％SAC显著提高了肝脏GSH-Px含量(p<0.05)，添加1.2％和2.4％SAC显著降低了肝脏MDA含量(p<0.05)。2.4％处理组的GSH-Px活性显著高于对照组(p<0.05)。
[0066]表8玉木耳富硒培养物对组织硒含量的影响
[0067]
[0068]
[0069]从表8可以看到，与其他3个处理相比，添加2.4％SAC的育肥猪LDM中硒含量更高(p<0.05)。饲喂SAC日粮的猪肝脏硒含量有升高趋势(p＝0.09)。
[0070]表9玉木耳富硒培养物对胴体性状和肉质的影响
[0071]
[0072]由表9可知，饲喂不同水平SAC对猪的胴体性状和肉品质没有影响。
[0073]表10玉木耳富硒培养物在模拟货架期试验中对鲜肉抗氧化状态影响
[0074]
[0075]由表10可知，模拟零售展示第6天，与对照组相比，2.4％SAC组的鲜肉MDA含量较低(p<0.05)。
[0076]综上所述，玉木耳富硒培养物在促进猪生长发育、提高抗氧化能力、肌肉硒含量和提高肉氧化稳定性方面效果较好。
[0077]本发明的实施方案已公开如上，但并不仅仅限于说明书和实施方案中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里所示出与描述的图例。
